微量証物DNA 偵測與鑑定技術之研究
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- 最後更新日期：113-01-15
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中文摘要
法醫檢品微量証物的鑑定上，一直有DNA檢品量過少，再經DNA萃取純化後 ，檢品DNA往往已漏失不見的困擾，儘管PCR技術理論上應可將極微量的DNA做等比級數的擴大，但漏失不完整的、甚至是完全漏失DNA的檢品，就算是使用目前最受囑目並廣泛運用於人別鑑定的short tandem repeats（STR），雖有其DNA長度較短、較容易PCR複製的優點，也常常無法得到完美的STR 基因座分型結果。
本研究為解決微量証物的DNA檢出不良情形，曾實驗以顯微注射系統，在顯微鏡下用特殊微小玻璃針挑出檢品中微量的白血球細胞， 捨棄一般傳統標準的DNA萃取方式，利用熱漲冷縮的原理將細胞DNA釋放出來，經PE Applied Biosystems公司出品的STR AmpFlSTR Cofiler Kit試驗，其基因座包括D3S1358、D16S539、TH01、TPOX、 CSF1PO 、D7S820及可辨別性別的Amelogenin，在初步的研究發現，在單一細胞PCR的Cofiler STR分型的實驗中，大多數的基因座型別可被成功分型出來，但也有些異合子（Heterozygous loci）基因座型別因優勢的PCR複製產生基因型漏失或因複製不全導致基因型增多等基因座型別失真的現象，幸運的是並非所有的單一細胞PCR皆會產生基因型漏失或基因型增多的失真現象，所以多次重複做單一細胞PCR的分析將可得到較正確的結果，單一細胞PCR Cofiler STR分型的實驗中雖未能得到穩定的結果，但將此技術使用粒線體DNA的定序分型上，卻有明確及穩定的結果可供鑑定。另外將白血球細胞數提高至10至30個來進行Cofiler STR的微量細胞PCR分型，所有的基因座型別皆可穩定正確的表現出來，建立在上述的研究基礎上，本研究以白血球細胞為材料，稀釋成各種不同濃度的細胞數，來測試各種PE Applied Biosystems公司出品的STR AmpFlSTR Profiler plus Kit、STR AmpFlSTR Cofiler Kit、STR AmpFlSTR SGM plus Kit多型性STR套組，結果發現在此種非傳統標準的DNA萃取的熱漲冷縮的方式下，未經DNA萃取的白血球數十個以上至千個細胞左右的PCR下皆可以被成功的完全分型，另外粒線體DNA的定序分型比多型性STR套組更為敏感在細胞更低的狀態下，即可得到HVI、HVII完整正確的定序型別。
此結果對日後微量檢品的鑑定有著相當程度的激勵，經由進一步實驗研究，將上述的方法應用在科學鑑識上常見的微量檢品DNA鑑識，包括唾液沾染物、體液沾染物等可能有微量DNA殘留但難檢出的實驗物品，來評估本研究開發的技術對微量檢品的鑑定有無實質助益。實驗結果顯示此方法在案件的實際運用上，可將經一般傳統標準的DNA萃取方式處理未能檢出STR型別的性侵害案酒瓶的女性體液、藥丸上的唾液、毒品吸食器吸管上的唾液等証物，在未經DNA萃取下，僅利用熱漲冷縮的原理將細胞DNA釋放，直接進行多型性STR複製，結果皆出現完美的型別， 另外在杯口唾液DNA、煙蒂唾液DNA、杯子握把DNA及掌紋DNA多型性STR型別的鑑定上，此處理方法也得到多型性STR DNA的型別，足証此新開發的超微量檢品處理方法，對DNA鑑定的成功率已大大的提昇了。
關鍵字：超微量檢品、顯微注射系統、STR、粒線體DNA、單一細胞PCR、科學鑑識